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DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DO COMPLEXO E. HISTOLYTICA/ E. DISPAR POR MULTIPLEX-PCR E PCR TEMPO REAL EM AMOSTRAS DE FEZES
Entamoeba dispar
PCR
Entamoeba histolytica
Reação em cadeia da polimerase
Reação em cadeia da polimerase multiplex
Reação em cadeia da polimerase em tempo real
Entamoeba histolytica
Entamoeba dispar
PCR
Gomes, Thiago dos Santos | Postado em:
2008
Resumo
O gênero Entamoeba tem grande importância médica entre os protozoários que parasitam o homem, compreendendo várias espécies que são morfologicamente indistinguíveis através da microscopia óptica. No entanto, a espécie considerada capaz de causar doença, Entamoeba histolytica, era anteriormente considerada uma única espécie que compreendia cepas patogênicas e cepas não-patogênicas. Recentemente, evidências suficientes foram encontradas reclassificando esse protozoário em duas espécies morfologicamente idênticas: a potencialmente patogênica E. histolytica e a não-patogênica E. dispar. Essa reclassificação trouxe a necessidade de se reavaliar a epidemiologia da amebíase, devido à alta freqüência de E. dispar, sendo considerada como E. histolytica. Devido a isso, atualmente quando na microscopia óptica observa-se o cisto característico, o mesmo é considerado do complexo E. histolytica/E.dispar. Dependendo da forma evolutiva e das condições em que se encontre, a E. histolytica pode habitar determinados meios: o intestino seguindo seu ciclo biológico, o cisto permanecendo no solo ou água durante algum tempo após ser eliminado em fezes moldadas, ou nos tecidos ao desenvolver a doença invasiva. O diagnóstico laboratorial da amebíase na rotina dos laboratórios clínicos é baseado no exame parasitológico de fezes, no qual é realizada a pesquisa de formas evolutivas de E. histolytica, E. dispar, E. moshkovskii e E. hartmanni. No entanto, essa técnica não é capaz de identificar entre essas espécies morfologicamente semelhantes de E. histolytica, dando ao método um caráter mais sugestivo do que diagnóstico. Por isso, cada vez mais ensaios moleculares, como o ELISA para detecção de antígeno ou anticorpo e como a PCR para detecção de DNA, são descritos na busca de fornecer métodos diagnósticos mais sensíveis, específicos e rápidos. Neste estudo foram avaliadas as técnicas de Multiplex-PCR e PCR Tempo Real no diagnóstico diferencial entre E. histolytica e E. dispar em amostras, provenientes de moradores do projeto de assentamento Frei Vantuy da cidade de São Jorge de Ilhéus na Bahia, diagnosticadas como positivas pelo exame parasitológico de fezes (EPF). Pela Multiplex-PCR, seis entre 24 amostras que eram consideradas positivas para o complexo E. histolytica/E. dispar pelo EPF, foram diagnosticadas como positivas para E. dispar e nenhuma para E. histolytica. Pela PCR Tempo Real, uma amostra foi positiva para E. histolytica e 13 amostras foram positivas para E. dispar. A técnica de Multiplex-PCR apresenta uma boa sensibilidade e especificidade, no entanto, o PCR Tempo Real detectou DNA em um número maior de amostras. Uma hipótese levantada para este resultado seria o baixo rendimento do processo de extração de DNA, com concentrações de DNA abaixo inclusive do limite de detecção do Multiplex-PCR, mas possível pela PCR Tempo Real por ser um método muito mais sensível. Quanto aos resultados negativos, eles podem indicar resultados falso-positivos pela microscopia ou, também, a presença de infecções por outras espécies de amebas morfologicamente semelhantes, por isso não sendo identificadas pelo método utilizado no estudo, visto que foram utilizados apenas iniciadores específicos para a amplificação de seqüências das espécies E. histolytica e E. dispar.
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Tipo de documento
Trabalho de conclusão de cursoAssunto(s)
Entamoeba histolyticaEntamoeba dispar
PCR
Entamoeba histolytica
Reação em cadeia da polimerase
Reação em cadeia da polimerase multiplex
Reação em cadeia da polimerase em tempo real
Entamoeba histolytica
Entamoeba dispar
PCR
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